Вся библиотека >>>

Содержание >>>

 

Медицинская библиотека

Эмбриональные стволовые клетки: фундаментальная биология и медицина


Репин В.С., Ржанинова А.А., Шаменков Д.А.

 

ГЛАВА 2. Стволовые клетки в эмбриогенезе мозга млекопитающих

 

4. Стволовое пространство эпендимы

 

 У зародышей млекопитающих нейрональная трубка ( позднее -выстилка желудочков и субэпендимальный слой)  являются главным поставщиком новых нейронов и глии.  Долгое время считалось, что эти зоны прдуцируют новые клетки только в развивающемся мозге.  Однако  следы эмбриональной ткани и эмбриональных процессов найдены у взрослых особей. Для идентификации S- прогениторных клеток в околожелудочковых пространствах  вводили  бромдезоксиуридин ( БУДР- аналог тимидина), который встраивается в синтезир ных моноклональных антител.  При  длительном мечении исследовали миграцию  уемую ДНК.  Визуализацию БУДР+ клеток проводили с помощью фруоресцентно мече БУДР-меченых клеток в мозге. Этим метчиком удалось обнаружить сотни новобразованных клеток в субэпендимальном пространстве, в гиппокампе. В субвентрикулярной зоне появлялся один новый нейрон на 2000 клеток в сутки (нейроны возникали в 2 раза чаще, чем глия). С помощью БДУР установили главные потоки миграции  клеток в  обонятельную луковицу, гиппокамп, gyrus dentatus.  В случае повреждения головного или спинного мозга число регенерирующих предшественников в субэпендимальной зоне желудочков резко возрастало.

На первом этапе пришлось исключать возможность миграции “пришлых” СК через циркуляцию и  pia mater. Если хирургически убрать агрегаты СК из субэпендимальных пространств, в самой эпендиме увеличивалось количество нестин-положительных клеток и быстро восстанавливались  агрегаты  нестин +  клеток. Клетки по периферии агрегатов СК постепенно теряли нестин.  Если  клетки клонов были мечены  DIL ( либо геном бета-галактозидазы), то  спустя 10-15 дней меченые клетки выявлялись в луковице обнятельного эпителия.  Лишь большие концентрации метки давали надежные результаты .

Покоящиеся стволовые клетки,  встроенные в монослой эпендимы,  не имели рецептора к FGF-2. Делящиеся клоны экспрессировали рецептор для FGF-2.  Внутрижелудочковое введение FGF-2  эмбрионам 16-18 дня гестации приводило к бурной пролиферации нестин+ клеток в перивентрикулярной области, которое завершалось появлением новых порций клеток в коре больших полушарий, обонятельной луковице и гиппокампе. При введении тех же доз FGF-2  в желудочки мозга взрослых животных наблюдали волну пролиферации стволовых клеток в эпендиме/субэпендиме без усиления пролиферации и численности клеток в коре больших полушарий (Vaccarino F.M., Ganat Y., Zhang Y. et al., 2001)

Сам монослой эпендимы практически не включал БУДР. К субэпендиме прилегают скопления гетерогенных популяций. Мелкие довольно плотно упакованные кластеры клеток включали  БУДР. Вокруг этих кластеров располагались более крупные вытянутые клетки с мигрирующей ламеллой.  Этот слой клеток имел рецепторы для FGF-2, EGF, TGF-alpha.  Мигрирующие предшественики нейронов не имели миелиновой оболочки.   Lois и  Alvarez-Buylla  на мышах доказали миграцию нейрональных предшественников  из субвентрикулярной зоны мозга крыс в эпителий луковицы обонятельного эпителия мышей. Миграцию предшествеников  визуализировали с помощью меченых антител к нестину и белку-транспортеру 2 (переносчик медиаторов-моноаминов).  В этой же лаборатории было показано, что донорские меченые НСК, вводимые в субвентрикулярную область 15-дневных зародышей мышей,  давали  многочисленные клоны клеток, которые мигрировали, пролиферировали и стабильно заселяли практически все отделы растущего мозга по главным осям роста и клеточной экспансии мозговой ткани зародыша (Lim D.A., Fishell G.J., Alvarez-Buylla A., 1997) . Образование новых популяций клеток в субэпендиме особенно хорошо изучено  в мозге певчих птиц (канареек). По уровню обмениваемости клеток в зоне пения головной мозг этих птиц  более напоминает костный мозг и  эпидермис кожи. Вытянутые глиальные клетки микроокружения сооружали “рельса и колеса” для направленной миграции новообразованных прогениторных клеток.  Антитела к глиальному фибриллярному белку, N-кадхерину, виментину частично  блокировали миграцию клеток.  Сама миграция поддерживалась градиентом сигналов (IGF-1, IGF-2, TGF-beta, BDNF, NT-3, NTB). Показательно, что в цикле обновления нейронов за счет пула НСК в мозге взрослых животных играют эндогенные «минорные» ростовые факторы, особенно IGF1 и IGF2. В культуре эти функции факторов обновления пока не удается воспроизвести, а уж тем более изучить (Brooker G., Kalloniatis M.,Russo V. Et al.,2000)   Klas Johansson  из Королевского института в Стокгольме подтвердил, что главным источником НСК  является внутренняя выстилка желудочков. Количество НСК в эпендиме увеличивалось в 50 раз при повреждении спинного мозга. Изолированные in vitro НСК  формировали нейросферы. Клетки  кластеров  дифференцировались в  нейроны, астроциты и олигодендроциты .   НСК  мигрировали даже в зоны повреждения спинного мозга.

 

<<< Содержание книги       Следующая страница >>>